Новые подходы к изучению филогении растения рода Linaria

Слайд 1

Работу подготовила: Романова Екатерина Алексеевна Ученица школы №303 10 «АШ» класса Научный руководитель: Матвеева Татьяна Валерьевна, Калиничева Наталья Юрьевна. Место проведения: Лаборатория генной и клеточной инженерии растений Санкт-Петербургского государственного университета. Новые подходы к изучению филогении растения рода Linaria

Слайд 2

Актуальность темы: Бурное развитие молекулярной филогенетики на протяжении последних двух десятилетий дало в руки ботаников новые методы для выявления родственных связей между групп растений. Филогения входит как необходимая составная часть почти в каждый отдел научного курса.

Слайд 3

Цель работы: Знакомство с молекулярными ДНК маркерами, используемыми для филогенетических исследований растений, на примере рода Linaria . Задачи: Знакомство с литературой; Освоение метода ПЦР; Изучение гель электрофореза; Изучение полиморфизма Т-ДНК маркера двух видов льнянок

Слайд 4

Материалы и методы исследования Материалы. Материалами в моей работе служили гербарий двух видов льнянок L inaria hepatica и L inaria incompleta. Методы: Работа состояла из письменной и экспериментальной частей. Экспериментальная часть включала материал (ДНК, выделенная из гербария L. hepatica и L. incompleta), методы (ПЦР, электрофорез).

Слайд 5

Теоретическая часть работы Полимера́зная цепна́я реа́кция ( ПЦР )- экспериментальный метод молекулярной биологии, позволяющий многократно амплифицировать выбранный фрагмент ДНК без помощи рестриктаз, векторов или клетки-хозяина. Кэри Муллис - 1983 год Полимеразная цепная реакция

Слайд 6

Проведения ПЦР ДНК-матрица; два праймера; дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T); термостабильная ДНК-полимераза; ионы Mg2+; буферный раствор

Слайд 7

Детекция результатов ПЦР Метод гель-электрофореза Наиболее распространенным до недавнего времени являлся метод электрофореза, основанный на разделении молекул ДНК по размеру

Слайд 8

Агробактериальная трансформация Ti -плазмида Т-ДНК хромосомы Агробактерия Ti -плазмида Ген вирулентности Цитокинин Опин ДНК Точка начала репликации Ауксин

Слайд 9

Растительная клетка Agrobacterium tumefaciens Ti- плазмида хромосома Т-ДНК Agrobacterium tumefaciens Agrobacterium rhizogenes

Слайд 10

Трансформация табака Nikotiana tabakum штаммами Agrobacterium rhizogenes Бородатый корень

Слайд 11

В геномах растения может быть фрагмент т-ДНК. Такое описано в пределах рода Linaria . Linaria incompleta Linaria hepatica В геномах растений Linaria обнаруживаются фрагменты Т-ДНК A.rhizogenes

Слайд 12

Практическая часть работы. Выделение геномной ДНК Оборудование: водяная баня(нагретая до +56°С), ,дозаторы, центрифуги ,фарфоровые ступки и пестики. Расходные материалы: микроцентрифужные пробирки на 1,5 мл,наконечники для дозаторов на 1мл,200мкл. Проведение ПЦР Оборудование: ДНК-амплификатор, дозаторы Расходные материалы: микроцентрифужные пробирки на 0,5 мл, наконечники для дозаторов на 10 и 200 мкл. Проведение гель-электрофореза. Оборудование: камеры для электрофореза, источники тока, дозаторы, трансиллюминатор. Расходные материалы: наконечники для дозаторов на 10 и 200 мкл.

Слайд 13

Подведение итогов В моей работе я пришла к выводу, что мутация в ДНК растения Linaria , т.е. выпадение нуклеотидов, имело место не зависимо. Т.е. скорей всего, это были независимые события, это эволюционно не зависимая группа видов.

Слайд 14

Список использованной литературы. http://www.invitro.ru/for-clients/mat/1133/) http://gdayli.ru/index.php?option=com_content&id=11%3Apolimeraznaya-tsepnaya-reaktsiya-istoriya-vozniknoveniya&Itemid=3 Матвеева Т.В.,Богомаз Д.И.,Лутова Л.А. Малый практикум по генной инженерии –СПБ: Реноме,2011. - 52с. : ил. http://www.dna-technology.ru/files/images/metodichki/OsnoviPCR.pdf http://humbio.ru/humbio/tarantul_sl/000000a9.htm Van Larebeke N., Engler G.,Holsters M.,et al. Large plasmid in A. tumefaciens essential for crown gall-in-ducing ability // Nature. 1974. V .252. p .169-170/ Pavlova, O. A., Matveeva, T. V., and Lutova, L. A.2009. Characteristics of the ability of Linaria plants to Agrobacterium mediated transformation. Page 553 in: Abstr. Fifth Cong. Vavilov Soc. Genet. Breed. (VOGiS), Part 1, Moscow.