Определение гемоглобина
презентация к уроку

Слайд 1

Методы определения концентрации гемоглобина

Слайд 2

Оценка содержания гемоглобина: клиническое значение: ↓ Снижение концентрации гемоглобина: анемии (нарушение синтеза Hb , кровопотеря, гемолиз, недостаток выработки эритроцитов и т.п.)

Слайд 3

­ ↑ Повышение концентрации гемоглобина: полицитемия, гемоконцентрация при дегитратации, ожогах, упорной рвоте; пребывание на больших высотах, чрезмерная физическая нагрузка или возбуждение;

Слайд 4

­ заболевания легких, приводящие к снижению легочной перфузии, плохой аэрации легких; хроническое химическое воздействие нитритов, сульфонамидов, вызывающих образование мет- и сульфогемоглобина. ­ ↑ Повышение концентрации гемоглобина:

Слайд 5

Термин « общий гемоглобин » распространяется на совокупность форм гемоглобина , которые присутствуют в крови у здоровых людей или же появляются при патологии:

Слайд 6

окси гемоглобин ( HbO 2 ) ; восстановленный гемоглобин ( Hb) (синонимы: гемоглобин (Н Hb ++ ), феррогемоглобин ( Hb 4 ) ); карбо гемоглобин ( HbCO 2 ) (СО 2 – углекислый газ) Нормальные формы гемоглобина

Слайд 7

карбо кси гемоглобин ( HbCO) (син.: карбонмоноксигемоглобин ( HbCO) 4 ; мет гемоглобин ( MetHb), синонимы: гемИ глобин (Hb +++ ), ферригемоглобин ( Hb 4 +3 ); сульф гемоглобин ( SHb), синоним – вердоглобин S; гемИглобинцианид ( HiCN) (син.: цианметгемоглобин ( CNMetHb) ) ; и др. Патологические формы гемоглобина

Слайд 8

МЕТОДЫ АНАЛИЗА Больше всего в крови представлены: оксигемоглобин, дезоксигемоглобин, карбоксигемоглобин, метгемоглобин. Спектры поглощения оксигемоглобина (HbO 2 ), дезоксигемоглобина (Hb Н ) метгемоглобина (HbMet), карбоксигемоглобина (HbCO)

Слайд 9

Для определения гемоглобина чаще всего анализируют производные гемоглобина , образовавшиеся в процессе его окисления и присоединения к гему различных химических групп, приводящих к изменению валентности железа и окраски раствора .

Слайд 10

При количественном определении гемоглобина колориметрическими методами возникает проблема в выборе реагента , который превращал бы все производные гемоглобина только в одну форму перед фотометрическим анализом.

Слайд 11

Лучшими методами, количественно превращающими гемоглобин в его производные, оказались: гемиглобинцианидный (HbCN), гемихромный (HbChr) и гемиглобиназидный (HbN3), которые при фотометрировании дают наименьшую ошибку определения среди других методов анализа.

Слайд 12

ГемИглобинцианидный метод (метод Драбкина) (1936) Спектр поглощения цианметгемоглобина ( CNmetHb ) Принцип метода : все формы гемоглобина преобразуются в гемиглобинцианид (с помощью трансформирующего реагента (содержащего железосинеродистый калий, цианид калия и гидрокарбонат натрия) при длине волны 540 нм

Слайд 13

ГемИглобинцианидный метод (метод Драбкина) (1932) А 540 HiCN x 16114,5 x 10 -3 x P Hb (г/л)=  =367,7 x А 540 HiCN 11,0 х L А 540 HiCN - абсорбция раствора гемоглобина при длине волны 540 нм, 16114,5 - молекулярная масса мономера гемоглобина, 11,0 - коэффициент миллимолярной экстинкции цианметгемоглобина, L - длина оптического пути, равная в большинстве фотометров 10 мм, 10 -3 - перевод молярной массы гемоглобина в миллимолярную массу Р – разведение крови (1 : 251, соотношение 20 мкл крови и 5,0 мл трансформирующего раствора)

Слайд 14

Перевод гемоглобина в гемиглобинцианид осуществляется при его взаимодействии с трансформирующим раствором , содержащим феррицианид калия, цианид калия, дигидрофосфат калия и неионный детергент: Детергент усиливает гемолиз эритроцитов и предотвращает мутность, связанную с белками плазмы. Дигидрофосфат калия поддерживает уровень рН, при котором реакция проходит за 3-5 минут.

Слайд 15

Феррицианид калия окисляет все формы гемоглобина в метгемоглобин , который образует с цианистым калием гемИглобинцианид, имеющий красноватый цвет, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в пробе. Окси гемоглобин Дезокси гемоглобин Карбокси гемоглобин Мет гемоглобин

Слайд 16

Характеристика метода Гемиглобинцианидный метод, разработанный в 1936 г. Драбкиным, был одобрен Международным Комитетом по стандартизации в гематологии (ICSH) в 1963 г. Основным достоинством гемиглобинцианидного метода является то, что HbCN (гемИглобинцианид) является стабильным производным гемоглобина, и все имеющиеся в крови формы гемоглобина могут быть быстро и количественно превращены в HbCN; Метод обеспечивает возможность получения результатов с погрешностью, НЕ превышающей ± 2%.

Слайд 17

Требования безопасности при работе с раствором, содержащим цианистые соединения При всех положительных параметрах гемиглобинцианидного метода большим его недостатком является то, что он основан на применении ядовитых цианистых соединений ;

Слайд 18

Вместо цианистого калия многие применяют маскированный цианид - ацетонциангидрин , который в процессе приготовления трансформирующего раствора распадается с образованием цианид-иона. Характер действия ацетонциангидрина на человека сходен с действием синильной кислоты , но эффект развивается медленнее . Ацетонциангидрин всасывается через кожу и может вызывать тяжелые отравления . Его предельно-допустимая концентрация (ПДК) составляет 0,9 мг/м 3 , класс опасности 2.

Слайд 20

Оптическая схема

Слайд 21

Зависимость показаний гемоглобинометра “ МиниГем-540” от времени инкубации образцов крови с трансформирующим раствором Из графика видно, что лишь на 15 минуте от начала реакции лизиса показания прибора начинают стабилизироваться и далее уже не меняются в течение последующих 2 часов . Поэтому, измерение гемоглобина следует проводить не ранее, чем через 20 минут после внесения крови в пробирку с трансформирующим раствором, когда весь имеющийся в пробирке гемоглобин преобразуется в конечный продукт реакции - цианметгемоглобин.

Слайд 22

Гемихромный метод Принцип гемихромного метода основан на переводе всех форм гемоглобина в одну - гемихром . Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в пробе. Гемоглобин Геми-хром Трансформир. р-р: Жирные кислоты + Феррицианид К (или додецилсульфат Na)

Слайд 23

Гемихромный метод Спектр поглощения метгемоглобина ( HbMet ) Максимум кривой поглощения гемихрома находится на длине волны 533 нм . Ближайшая к 533 нм типовая длина волны – 540 нм, на которой и проводится фотометрирование с учетом коэффициента пересчета (фактора) для 540 нм .

Слайд 24

Основным достоинством гемихромного метода является то, что содержащиеся в крови Формы гемоглобина могут быть быстро и количественно превращены в HbChr при полной безвредности трансформирующего раствора

Слайд 25

Оптическая схема